среда, 29 февраля 2012 г.

Діагностика краснухи в Російській Федерації

Проблема краснухи для Російської Федерації досить серйозна до сих пір. Так економічний збиток, що наноситься тільки придбаної краснухою, все ще великий і складає мільйони рублів щорічно. Хоча придбана краснуха - відносно легке захворювання, а ускладнення у вигляді енцефаліту і тромбоцитопенії досить рідкісні, вірус краснухи має тератогенних властивостями, особливо в першому триместрі вагітності, викликаючи у дітей синдром вродженої краснухи (СВК), а це вроджені пороки серця, мікроцефалія і інші ураження внутрішніх органів. У багатьох на пам'яті епідемія 1960-1964 рр.., Коли в США краснуху захворіло 50 тис. вагітних жінок, що призвело до народження 20 тис. дітей з СВК, до 10 тис. викиднів і мертвонароджених. Зараз ситуація по краснухи також серйозна. Щорічно в світі реєструється 300 тис. дітей з СВК. Точних даних по Росії до цих пір, на жаль, немає.

У Росії в 2001 р. захворіло 574901, у 2002 р. - 341354, у 2003 р. - 125187, у 2004 р. - 146158 осіб, при цьому, 20-25% випадків припадало на осіб старше 15 років. При такій захворюваності, на думку проф. В.К. Таточенко та ін, очікуване число випадків СВК в РФ повинна перевищувати 500-700 випадків на рік. Точність обліку СВК в Росії до цих пір низька. Так в 2000 р. офіційно було зареєстровано всього 11 випадків, а в 2003 р. - 2 випадки СВК. У той же час, у ряді регіонів під час епідемії краснухи почастішало народження дітей з вродженими вадами серця, глухотою і сліпотою. Причому, в 12-85% випадків матері цих дітей перенесли краснуху на 1-8 тижні вагітності. Спеціальні дослідження показали, що на частку СВК припадає 27-35% внутрішньоутробної патології, а за даними інших авторів цей показник може бути і вище. Офіційні дані по Росії свідчать, на жаль, про інше.

Санэпидстанция

У зв'язку з цим, першочерговим за важливістю, на наш погляд, є проблема вдосконалення діагностики краснухи в Росії. Необхідні специфічні, чутливі методи, що дозволяють діагностувати краснуху і диференціювати її від подібних по клініці захворювань, наприклад, кору, грипу, парагрипу, аденовірусної, респіраторно-синцитіальних інфекції, скарлатини, інфекційної еритеми, алергічних висипань, сироваткової хвороби, ентеровірусних інфекцій та ін
У широкій практиці діагноз краснухи ставлять на підставі клінічних симптомів, епідеміологічних даних і результатів лабораторної діагностики. У типових випадках клінічний діагноз поставити неважко. Однак за останні роки краснуха в ряді випадків придбала іншу течію (змінився інкубаційний період, вираженість симптомів інтоксикації, характер висипу, вік хворих). Складений клінічний діагноз при стертою формою краснухи. Утруднена, а іноді просто не вирішується, особливо в разі стертих форм, диференціальна діагностика краснухи і кору. В цьому випадку діагноз краснуха чи кір ставлять за допомогою епідеміологічних даних і, насамперед, з урахуванням відомостей про контакті. Однак у даний момент в умовах розпочатого зниження захворюваності на краснуху, стертості клініки краснухи і кору, епідеміологічний метод поступово починає втрачати своє першорядне діагностичне значення.

Для діагностики краснухи в даний час використовують, в основному, серологічний метод, рідше - вірусологічний. Відомо, що вірусологічний метод діагностики заснований на ранньому виділення (перші 72 години після появи висипу) вірусу краснухи з носоглоткових змивів на культурі клітин або (частіше) з лейкоцитів хворого на різних культурах клітин (Vero, лімфобластахмармазетов В-95ф, трансформованих вірусом Епштейна-Барр та ін.) В цьому випадку діагностика краснухи грунтується на виявленні вірусу, його РНК або вірусних антигенів. Через складність вірусологічних, молекулярно-біологічних методик, такі дослідження проводяться лише в кількох науково-дослідних лабораторіях РФ. На перше місце в діагностиці краснухи серед лабораторних методів вийшли серологічні методи діагностики. Серологічні методи служать не тільки цілям діагностики. З їх допомогою може і повинна будуватися стратегія і тактика програм вакцинації, програм зниження СВК до 2010 р. до <0,01 на 1000 пологів живою дитиною, контроль імуногенності та ефективності профілактичних протівокраснушних препаратів та оцінка популяційного імунітету до краснухи серед населення (насамперед, жінок фертильного віку).

Для серодіагностики краснухи використовується, в основному, три методи: РГГА (реакція гальмування гемаглютинації), реакція нейтралізації (РН) і імуноферментний аналіз (ІФА).

Довгі роки в нашій країні для діагностики краснухи традиційно використовувалися РН і РТГА. Необхідно зауважити, що постановка реакції нейтралізації вимагала дуже високої кваліфікації і була дуже тривалої (перші попередні результати дослідники отримували через 7-10 днів). Для постановки ж реакції гальмування гемаглютинації необхідні були свіжі еритроцити голубів, і вона була досить трудомісткою через необхідність видалення з сироваток крові неспецифічних інгібіторів гемаглютинації.

Більше 20 років тому в світі став використовуватися ІФА, який і до цього дня відповідає всім сучасним вимогам (вловлює весь спектр антитіл, високочутливий, специфічний, простий і швидкий у постановці). Особливо він зручний для експрес-діагностики краснухи та СВК. Найчастіше для серодіагностики краснухи використовують непрямий метод ІФА. В якості антигену на тверду фазу наносять або очищений вірус, або інфіковані їм культури клітин, або поверхневі (найбільш значущі) білки вірусу. Можуть наноситися і рекомбінантні білки, отримані генноінженерних способом, а також синтетичні пептиди, що імітують антигенні детермінанти структурних вірусних білків.

У Російській Федерації ІФА для діагностики краснухи та СВК використовується тільки останні роки. В даний час випускаються вітчизняні ліцензовані комерційні тест-системи: Краснуха-скрін (Біосервіс, Москва), ВектоРубелла - IgM, IgGстріп і IgG-авідність (Вектор Бест, Новосибірськ), Еколаб краснуха IgG (Еколаб, Електрогорськ). Крім того, в Росії ліцензована зарубіжна тест-система Краснуха IgM / IgG (Медак ГмбХ, Німеччина).

Для діагностики краснухи, особливо, краснухи у вагітних, і діагностики СВК в широкій практиці охорони здоров'я з метою відтворюваності і стандартності результатів при динамічному спостереженні найбільш доцільно, на наш погляд, використовувати тест-системи одного виробника. Для цього необхідні тест-системи, які дозволяють реалізувати два підходи. Класичний, заснований на виявленні вірусспеціфіческогоIgM-маркера поточної краснушной інфекції, і новий метод, що дозволяє диференціювати гостру інфекцію від інфекції, перенесеної в минулому (від перших днів до 1,5 місяців і більше), за визначенням авідності специфічних IgG. Це особливо важливо при діагностиці краснухи у вагітних жінок, так як нізкоавідниеIgG антитіла зберігаються протягом більш тривалого терміну в порівнянні з вірусспеціфіческіх антитілами класу IgM. Причому, за індексом авідності можна віддиференціювати гостру інфекцію (індекс авідності менше 30) від гострої відстроченої інфекції (30-50), а при індексі вище 60 - від інфекції, яка була у вагітної жінки більше 6 тижнів тому. Це особливо важливо, так як на всіх рекомендованих для експрес-діагностики краснухи імуноферментних системах, спрямованих на виявлення вірусспеціфіческіх антитіл класу М, не завжди можливо досягти точного результату. Ймовірно і отримання хибнопозитивних результатів за рахунок наявності в матеріалі ревматоїдного фактора. Крім того, гіпердіагностика може мати місце у випадку тестування осіб, інфікованих вірусом Епштейна-Барр, парвовирусом та ін У цьому випадку доцільність застосування ІФА, заснованого на визначенні авидностивирусспецифических антитіл, очевидна.

Гигиена

Для визначення популяційного імунітету і ефективності вакцинопрофілактики краснухи використовується непрямий ІФА, заснований на виявленні вірусспеціфіческіхIgG. Багато тест-системи лише напівкількісний оцінюють цей показник. Однак одержання тільки напівкількісної характеристики на сьогоднішній день вже не може повністю задовольнити практику. Необхідна кількісна оцінка, особливо, у випадках вивчення популяційного імунітету або оцінки ефективності вакцинопрофілактики краснушной інфекції. Зараз уже добре відомо, що якщо мова йде про захист від краснухи, то концентрація протівокраснушних антитіл в сироватці повинна бути не менше 10 МЕ / л. Тільки в цьому випадку людина (особливо жінка фертильного віку) буде захищений. Тому важливо, щоб тест-система для визначення протівокраснушних антитіл класу IgG містила набір реагентів для калібрування і дозволяла б визначати титр протівокраснушних антитіл у сироватках людей в міжнародних одиницях (МО).
Актуальність проблеми своєчасного діагностування краснухи вагітних і синдрому вродженої краснухи в Росії очевидна. Подальший розвиток методів лабораторної діагностики краснухи передбачає використання ПЦР (полімеразна ланцюгова реакція). Ефективність цього методу дуже висока. ПЛР - надчутлива реакція. Однак контамінація реагентів і ДНК може служити і головною причиною хибнопозитивних результатів при її постановці. ПЛР - дорогий метод, але його використання повністю виправдано при діагностиці краснухи вагітних і СВК у дітей.